Определение резус фактора крови: анализ, методы, цоликлонами, по родителям

«Люди голубой крови», «королевская кровь», «кровный брат» – существует много выражений, которые затрагивают одну из важнейших систем в организме человека. Она отвечает за тканевое питание, дыхание, обмен веществ, всасывание и усваивание питательных веществ. Роль кровеносной системы сложно переоценить.

Здесь нет мелочей. Так, групповая принадлежность и резус-фактор играют большую роль в жизни человека. Особенно это важно для женщины. Определение группы, биохимический и другие анализы предваряют любое вмешательство в организм пациента.

Лечение практически каждого заболевания начинается с взятия биологического материала для исследования.

Интересные факты о группе крови

В Японии считают, что характер человека полностью зависит от того, какая у него групповая принадлежность крови. У обладателей первой группы преобладают такие качества, как самоуверенность и решительность. Люди со второй группой крови надежны, но замкнуты в себе. Те, кто обладают третьей, чаще всего честолюбивы и умны. У требовательных, уравновешенных людей течет в жилах кровь четвертой группы. По этому принципу многие создают семьи, заводят друзей, работодатели подыскивают себе сотрудников.

На Австралийском континенте живет удивительный человек Джеймс Харрисон. За свои 74 года он успел сдать кровь около 1000 раз! Медики утверждают, что как минимум 2 млн новорожденных детишек сумел спасти этот необычный донор. Он обладает не только самой редкой группой, но и может похвастаться наличием особых антител, которые помогают младенцам с тяжелой анемией успешно бороться с недугом.

Система АВО

В мире существует 4 группы крови, имеющих свои особенности. Первая группа не содержит белков антигенов А и В, поэтому она является универсальной в качестве донорской. Но человеку, имеющую такую группу крови, нельзя переливать никакую другую, кроме первой. Вторая группа носит антигены А. Она совместима с первой и второй. Третья группа крови имеет в своем составе антигены В. И к ней идеально подходит первая или третья. Четвертая группа содержит антигены А и В, и она совместима с кровью любой группы. В настоящее время врачи стараются осуществлять переливание реципиенту той же группы, что и его собственная.

Это общепринятая система, в которой работают все медицинские учреждения мира. Определение группы крови и резус-фактора проводят всем новорожденным детям, людям перед любым оперативным вмешательством, переливанием крови и ее компонентов. Особенно за этими показателями у женщин во время беременности наблюдают акушеры-гинекологи.

Методы определения группы крови

Существует несколько способов определения групповой принадлежности крови человека в лабораторных и даже домашних условиях:

1. По стандартным сывороткам.
2. По стандартным эритроцитам.
3. С применением цоликлонов.
4. По группе крови родителей.

Важно отметить, что определение группы крови и резус-фактора последним способом не является достоверным. Этот метод можно назвать «домашним». Он подходит в качестве развлечения подросшим детишкам, для лучшего понимания того, как же происходит наследование подобных признаков ребенком.

Как определить группу крови, используя цоликлоны

Применение цоликлонов – это простой и современный способ определения группы крови человека и ее резус-фактора. Препарат получают из биологического материала мышей и повсеместно используют в системе АВО. Плюсы цоликлонов в том, что они быстрее агглютинируются, то есть сворачиваются, с кровью и реакция становится более выраженной. Чаще всего лаборанты используют реагенты анти-А и анти-В, однако в некоторых случаях работают и с анти-АВ и анти-О. Определение группы крови с помощью цоликлонов требует меньше времени и подготовки.На специальном планшете делают две надписи соответственно названиям используемых цоликлонов. Под ними наносят небольшую каплю исследуемой крови, рядом — немного реагента. Стеклянной или любой другой чистой палочкой перемешивают обе жидкости, затем в течение двух минут медленно покачивают планшет для лучшего соединения и сворачивания белков. По реакции агглютинации судят о результатах. Полное отсутствие склеивания говорит о том, что исследуемая кровь принадлежит к первой группе. Склеивание с цоликлоном анти-А доказывает, что она относится к второй группе. Если наблюдается реакция с реагентом анти-В, значит, у пациента кровь третьей группы. При агглютинации с обоими цоликлонами ясно, что исследуемый материал содержит антигены А и В. Следовательно, является кровью четвертой группы.

Определение группы крови и резус-фактора с помощью цоликлонов является наиболее удобным и распространенным в настоящее время. Для того чтобы узнать резусную принадлежность, нужно на планшет нанести несколько капель цоликлона анти-D-супер и одну — исследуемой биологической жидкости. Далее нужно их смешать. Наличие реакции свертывания говорит о том, что пациент имеет положительный резус-фактор. Соответственно, отсутствие агглютинации означает то, что резус отрицательный.

Определение группы крови стандартными сыворотками

В этом случае используют стандартные сыворотки четырех известных групп. Каждого реагента берут по две серии, чтобы обеспечить наиболее точный результат. Для облегчения работы сыворотки окрашены каждая в свой цвет: О(I) – бесцветная, А(II) – синяя, В(III) – красная, АВ(IV) – желтая. На специальный планшет наносят сыворотки первых трех групп по две серии каждой. Рядом капают по одной капле исследуемой крови, взятой из пальца. Планшет аккуратно покачивают до полного перемешивания и по реакции агглютинации судят о результатах. Определение группы крови — это всегда скрупулезная манипуляция, которая требует внимательности и сосредоточения.

Стандартные эритроциты для определения группы крови

Определение группы крови стандартными эритроцитами – это еще один высокоточный метод выявления групповой принадлежности. Его проводят с использованием стандартных эритроцитов, полученных из материала донора. Сыворотку центрифугированной крови наносят на планшет в два ряда по три капли в каждом. Возле каждой из них помещают немного эритроцитарной массы в следующем порядке: О(I), А(II), В(III) — по две серии. Так же как и при определении группы другими методами, в этом случае тщательно перемешивают капли крови и реагенты и судят о результатах по свертыванию белка.

Определение групповой принадлежности ребенка по крови родителей

Определение группы крови по родителям – это, пожалуй, единственный «домашний» метод. Согласно закону наследования ребенок берет от отца и матери по одному антигену. В таблице ниже представлены все возможные варианты наследования ребенком группы крови.

I (ОО)	II(ОА)	III(ОВ)	IV(АВ)
I(ОО)	Только I	Или I, или II	Или I, или III	Или II, или III
II(ОА)	Или I, или II	Или I, или II	Любая с равной долей вероятности	Или II, или III, или IV
III(ОВ)	Или I, или III	Любая с равной долей вероятности	Или I, или III	Или II, или III, или IV
IV(АВ)	Или II, или III	Или II, или III, или IV	Или II, или III, или IV	Или II, или III, или IV

Определение группы крови ребенка по таблице может дать представление о наследовании генов и позволит с пользой провести время. Этот способ не является точным. Но он достаточно информативен. Разумеется, определение группы крови по родителям — это не самый лучший метод, для достоверного результата стоит обратиться в клинику.

Забор крови

Для определения групповой принадлежности берут материал из пальца и из вены. Для анализа используют как цельную кровь, так и сыворотку, которую получают в результате центрифугирования пробирки с биологическим материалом. Детям при рождении определение группы крови и резус-фактора проводят, применяя материал, взятый из пяточки.

Анализ берут в амбулатории или стационаре в условиях полной асептики и с использованием средств антисептики. Манипуляцию может делать только человек с медицинским образованием, а проведением реакции должен заниматься лаборант. Анализ проводят несколько раз разные медработники, чтобы исключить влияние человеческого фактора на результат исследования. Существуют приборы, которые способны точно и достоверно определить группу крови и резус-фактор, но даже после использования техники всегда проводится перепроверка, ведь здесь нельзя ошибаться.

Подготовка к сдаче крови на анализ

Группа крови и резус-фактор не меняются в течение всей жизни и не зависят от приема пищи, состояния здоровья, внешних факторов. Поэтому перед сдачей анализа не требуется специфической подготовки. Однако, чтобы снизить риск ухудшения качества исследования, важно сдавать материал натощак, а ужин должен быть легким и обязательно не позже 18.00.

Группа крови на рукаве

В жизни происходят разные ситуации, никто не застрахован от травм или несчастных случаев. Каждому человеку нужно знать свою группу крови, ведь при наступлении чрезвычайных обстоятельств эта информация может спасти жизнь в прямом смысле слова. Не зря в паспорт медработники ставят всем желающим соответствующую печать. Берегите здоровье свое и своих родных людей!

Методики определения групп крови, описание таблицы

Практически каждый человек хотя бы единожды за свою жизнь проходил тест для установления принадлежности группы крови. О методах проведения данного анализа и об их достоверности пойдет речь далее.

Для чего проводится диагностика?

Группа крови – это определенный ряд антигенов, размещенных на поверхности эритроцитов, которые и определяют их специфичность. Таких антигенов известно очень много, поэтому принято единую классификацию крови по АВО и резус-фактору.

Этот показатель в обязательном порядке определяется у пациентов перед хирургической операцией, военным, полицейским и другим категориям людей, которые могут потребовать срочного переливания крови.

Стандартная методика определения группы крови

Самый распространенный метод исследования данного показателя – это способ с применением стандартной сыворотки. Эта диагностика определяет общепринятые антигены по системе АВО.

Изогеммагглютинирующая сыворотка представляет собой совокупность специальных антител к наружным частичкам эритроцитов.

Если находится совместимый антиген, на который могут воздействовать антитела, то формируется комплекс, способствующий началу иммунно-защитного механизма.

Вследствие этого происходит склеивание эритроцитарных клеток крови (агглютинация). Если подобное происходит, то делается вывод о несовместимости крови.

Данные сыворотки изготавливаются из крови доноров по специальной системе, подразумевающая под собой извлечение плазмы, в которой и содержать антитела, после чего ее разводят изотоником – хлорид натрия, это проходит в несколько этапов:

• В емкость наливают 1 мл воды, в которой растворено 0,9% обычной соли.
• В эту же пробирку вносят такое же количество разведенной плазмы.
• Затем 1 мл данной жидкости вносят в емкость с изотоником.

Процесс позволяет получить соотношение 1:256. Если методика разведения будет нарушена, то есть большая вероятность получения ошибочных результатов.

Проведение исследования

На поверхность планшета наносится 0,1 мл каждой сыворотки в район, где нанесена нужная пометка. За тем берется исследуемая кровь объемом 0,01 мл для каждого образца. И затем проводится смешивание каждой капли сыворотки с кровью.

Спустя пять минут проводят диагностику. Тестирование считается положительным, если прошла реакция агглютинации. Исходя из результатов анализов, выполняется построение таблицы, в которую они и заносятся.

• Таблица результатов теста на группу крови с применением стандартных сывороток.
• 
• Методика перекрестных реакций

В этом случае, чтобы определить агглютиноген используют цоликлоны. Иначе стандартные сыворотки с технологией параллельного выяснения благодаря эталонным эритроцитарным клеткам.

Два этих способа весьма сходны между собой. Но различия все, же есть.

На поверхность, на которую предварительно помещаются различные сыворотки, наносят по небольшой капле обычных эритроцитов. Затем кровь разделяют на фракции при помощи центрифуги. И форменные элементы добавляют к стандартным сывороткам, а плазменную часть – к стандартным эритроцитарным клеткам. Оценивание результатов проводят через пять минут и показатели отмечают в таблице.

Благодаря данной методике исключаются ошибки при исследовании.

Метод с использованием цоликлонов

1. Если нет возможности определить группу крови стандартными сыворотками, то используют данную методику.
2. 
3. Цоликлоны – гибридные антитела, которые получают из в-лимфоцитов крови мышей.
4. Последовательность проведения диагностики такая:

1. После нанесения отметок на планшет, которые соответствуют виду цоликлона, наносится раствор.
2. К каждому образцу цоликлона вносят одну каплю диагностированной крови.
3. Оценка результатов через пять минут.
4. Для данной методики необходимо соблюдать специальные условия. Они включают в себя пригодность цоликлонов, температуру в помещении и уровень влажности.

Результаты анализов считаются позитивными в том случае, когда при смешивании данных фракций наблюдается реакция агглютинации. Если подобное произошло в двух образцах, то считается, что кровь относится к четвертой группе. Если реакция не наблюдается вовсе, то к первой. Диагностические ошибки в данной методике встречаются не часто.

Быстрый способ «Эритротест»

Выше перечисленные способы используются в медицине уже долгое время и распространены по всему миру. Но ввиду того, что отрасль постоянно развивается, вводятся быстрые диагностические методы по установлению принадлежности к группе крови. Таким нововведением считается и «Эритротест».

Чтобы определить показатель данным способом необходимо иметь следующее оборудование:

• Стандартный планшет с пятью лунками
• Скарификатор для прокола и получения биологической жидкости
• Стеклянная пипетка с резиновой грушей
• Пипетка для забора реактивов
• Палочки для смешивания компонентов

Основное преимущество эритротеста состоит в том, что исследование не требует дополнительных условий и доступно в тот момент, когда проведение стандартной диагностики невозможно. Последовательность проведения

В углублениях планшета размещают цоликлоны к антигенам поверхностного типа и основному, который отвечает за наследственную передачу резус-фактора. В последнюю лунку добавляют контрольную сыворотку, которая исключит ошибочный результат и верно укажет на принадлежность к той или иной группе.

• Оценивание результатов анализа проводится с помощью таблицы, в ней указываются возможные результаты тестирования.

Классификация по системе АВО

Группа крови, определение ее проводится исходя из специально разработанных норм. Существует определенная таблица, которая характеризует каждую группу крови.

Группы	Описание
I (0)	Эритроцитарные антигенные качества не наблюдаются
II (А)	Присутствие антигена А
III (В)	Наличие на поверхности эритроцитарных клеток антигена В
IV (АВ)	Присутствие обоих антигенов

Видео: Методы определения групп крови:

Как определить резус фактор крови

Рейтинг: 814

Резус-фактор крови человека показывает наличие или отсутствие на поверхности эритроцитов специфического протеина Rh. Если Rh присутствует, то кровь называют резус-позитивной Rh+, если отсутствует, то Rh-. Белковая молекула Rh присутствует на мембране эритроцитов 85% землян. Определение резус фактора крови проводят для предотвращения возможной несовместимости при процедуре переливания крови.

Влияние резус-фактора на состояние здоровья людей не установлено. Признак передаётся по наследству и не меняется всю жизнь.

Когда необходим анализ

Информация о присутствии или отсутствии Rh factor необходима, если предстоит гемотрансфузия или хирургическая операция, или женщина забеременела. Анализ выявления резус-фактора проводится во время определения группы крови.

Если происходит трансфузия резус-позитивной донорской крови резус-негативному реципиенту, возникает резус-столкновение.

Иммунная система организма реципиента начинает продуцировать антитела к резус-положительным эритроцитам, они разрушаются. Такое явление получило название «гемолиз».

Поэтому, при гемотрансфузии необходимо, чтобы кровь отдающего и принимающего совпадала по группе и по резусу.

Особую опасность представляет резус-конфликт крови во время беременности резус-негативных матерей. Если у резус–негативной матери формируется резус-позитивный плод, иммунная система вырабатывает антитела в крови к эритроцитам эмбриона и разрушает их.

Плод, в таком случае, погибает. Риск такого развития событий наиболее вероятен при второй и последующих беременностях. Разработаны методы предохранения от резус-конфликта Rh- матери и Rh+плода, позволяющие сохранить жизнь и здоровье будущего ребёнка.

При беременности очень важно знать резус фактор крови

Определение Rh крови происходит во время забора крови из пальца или вены для стандартного анализа крови.

Методы определения

Сущность всех методов определения резус-фактора заключается в прохождении реакции склеивания (агглютинации) эритроцитов.

Различают четыре метода определения резус-фактора:

Метод конглютинации

Для проведения анализа конглютинативным методом используют сосуды Петри, пипетки одноразовые, физраствор, стандартные serum ко всем группам крови.

Проведение анализа заключается в следующих действиях лаборанта:

• Наносят на поверхность чашки Петри три ряда(серии) капель реагента, по две в каждом;
• В каждую серию добавляют каплю испытуемой крови и по капельке контрольных позитивных и контрольных негативных эритроцитов;
• Смешивают и выдерживают на водяной бане при 47°C десять минут;
• Определяют результат. Позитивным считают выпадение хлопьев, а негативным их отсутствие.

Метод цоликлонов

Фактор резус обнаруживают при помощи моноклональных антител. Это иммуноглобулины в крови, которые продуцируются клетками, произошедшими от одной предшественницы, то есть моноклоном. Реагенты, выделенные из таких клеток, получили название цоликлоны.

Ампулы с цоликлонами

Определение резус-фактора крови цоликлонами проводят в натуральной крови. Используют метод прямого скучивания на планшете. В лунку пластины вносят одну крупную каплю цоликлона, рядом помещают каплю крови небольшого размера.

Кровь смешивают с реагентом при покачивании планшета. Первые признаки склеивания эритроцитов появляются, спустя 15 секунд, но результат определяют через три минуты. Позитивным для резуса считают появление крупиц свернувшейся крови.

Все исследования проводят в лаборатории при температуре 15-25°С и хорошей освещённости.

Ускоренный метод

Используют универсальную serum антирезус. Определение резус фактора крови методика ускоренная включает:

• Внесение в пробирку капли крови и двух капель препарата «антирезус»;
• Перемешивают содержимое пробирки поворачиванием без встряхивания. Содержимое равномерно распространяется по стенке пробирки;
• Добавление в пробирку физраствора в количестве около 3 мл и перемешивание содержимого при неоднократном переворачивании посуды;
• Наблюдение хлопьеобразования. Там, где они формируются, кровь Rh+.
• Этот метод быстрый, но не точный. Псевдопозитивная реакция с Rh- эритроцитами проявляется в случае нахождения на поверхности эритроцитов антигенов в крови, отношения к Rh не имеющих. Параллельно проводят ещё один тест с контрольной эссенцией усилителя. Если и в этом случае образуются хлопья, результат признают недостоверным и тестирование крови повторяют с новым реагентом.

Желатиновый метод

Широко используют желатиновый ускоренный метод определения Rh. Он состоит в добавке к крови одной капли 10 % эссенции желатина, десятиминутной выдержки пробирок в термостате при +37, с последующим добавлением подогретого изотонического р-ра NaCl. Желатин препятствует образованию неспецифической агглютинации.

Резус фактор родителей

Комбинация хромосом, влияет и на пол будущего ребёнка и на его резус-фактор. Существует вероятность определения группы крови по родителям. Если мать и отец лишены резусного антигена, то и их дети, будут иметь Rh-. Резус-позитивные гены обладают доминантностью, то есть, преимуществом пред резус- негативными.

Если у одного родителя Rh+, а у другого Rh-, шанс на получение ребёнком Rh+ составляет 75%, а на рождение с Rh- , соответственно, 25%. Если у обоих родителей Rh+, то в пятнадцати случаях из шестнадцати, у их чад тоже будут Rh+. И, только в одном случае из шестнадцати, существует вероятность появления на свет младенца с Rh-.

Сведения о резус-факторе необходимы, если есть показания для переливания крови. Гемотрансфузия возможна только при использовании совместимой по резусу, и группе. Определение Rh-factor у беременных является залогом предупреждения рисков для формирующегося плода. Лучше всего знать свой Rh на этапе планирования беременности, чтобы исключить резус-столкновение между Rh-матерью и Rh+плодом.

Определение резус фактора алгоритм

Еще врачи древности пытались восполнять кровопотерю путем переливания крови от человека человеку и даже от животных. Как правило, все эти попытки имели печальный исход.

И только в начале ХХ века австрийским ученым Карлом Ландштейнером были обнаружены различия в группах крови у людей, которые представляли собой особые белки в эритроцитах — агглютиногены, то есть вызывающие реакцию агглютинации — склеивание эритроцитов. Она-то и являлась причиной гибели больных после переливания крови.

Установлено 2 основных вида агглютиногенов, которые были условно названы А и В.

 Склеивание эритроцитов, то есть несовместимость крови, происходит в случае, если агглютиноген соединяется с одноименным белком — агглютинином, содержащимся в плазме крови, соответственно, а и b.

Значит, в крови человека не может быть одноименных белков, вызывающих склеивание эритроцитов, то есть если есть агглютиноген А, то в ней не может быть агглютинина а.

Обнаружено также, что в крови могут быть оба агглютиногена — А и В, но тогда она не содержит ни одного вида агглютининов, и наоборот. Все это и есть признаки, определяющие группу крови. Поэтому при соединении одноименных белков эритроцитов и плазмы развивается конфликт по группе крови.

Кровь человека как его специфический генетический признак еще до конца не изучена. В последние годы учеными открыты варианты подгрупп крови, разрабатываются новые технологии определения совместимости и так далее.

Крови также приписывается свойство влиять на здоровье и характер ее владельца. И хотя этот вопрос остается спорным, все же многолетними наблюдениями подмечены интересные факты. Например, японские исследователи считают, что можно определить характер человека по группе крови:

• обладатели 1-й группы крови — люди волевые, сильные, общительные и эмоциональные;
• обладатели 2-й группы отличаются терпеливостью, скрупулезностью, упорством, трудолюбием;
• представители 3-й группы являются творческими личностями, но в то же время слишком впечатлительны, властны и капризны;
• люди с 4-й группой крови живут больше чувствами, отличаются нерешительностью, порой неоправданно резки.

Что касается здоровья в зависимости от группы крови, то считается, что оно является наиболее крепким у большинства населения, то есть при 1-й группе.

Лица со 2-й группой склонны к болезням сердца и онкологическим заболеваниям, для обладателей 3-й группы характерен слабый иммунитет, низкая устойчивость к инфекциям и стрессам, а представители 4-й группы склонны к сердечно-сосудистой патологии, заболеваниям суставов, раку.

Однако не следует думать, что это звучит как приговор, и можно непременно заболеть. Это всего лишь наблюдения. А здоровье в большинстве случаев зависит от нас самих, от образа жизни и питания.

Группа крови и резус-фактор — индивидуальные генетические признаки, данные человеку от природы. Представления о них необходимы каждому современному человеку, чтобы избежать серьезных проблем со здоровьем.

Резус-фактор: отрицательный и положительный

Определение резус-фактора со стандартной сывороткой анти-резус.

1Вступительное слово: Мы проводим определение группы крови со стандартной сывороткой анти-резус в процедурном кабинете по назначению врача. На мне шапочка, очки, маска, халат, фартук, перчатки. Руки предварительно обработаны гигиеническим способом.

2 Оснащение:

1. Стандартная сыворотка анти-резус

2. Стерильная пробирка

3. Исследуемая кровь ( в пробирке)

4. Физиологический раствор ( в пробирке)

5. Стерильные пипетки 2 шт

6. Ёмкость с 3% раствором хлорамина

3 Техника манипуляции:

1. Внести пипеткой в пробирку две капли сыворотки анти-резус

2. Внести отдельной пипеткой одну каплю крови

3. Вращать между ладонями 5 мин

4. Внести 1 каплю физраствора в случае если наблюдается агглютинация.

5. Встряхнуть пробирку, наблюдать агглютинацию 5 мин.

6. Форма ответа: при определении резус фактора со стандартной сывороткой анти-резус..

1. Агглютинация не наблюдается – резус фактор отрицательный

2. Агглютинация наблюдается – резус фактор положительный

1. После проведения манипуляции все использованные предметы замачиваются в емкости с трехпроцентным раствором хлорамина.

Грубые ошибки:

1. Не использование средств защиты медработника.

2. Нарушение пропорции сыворотки и крови 2:1

3. Не соответствие картины агглютинации заключению о резус пренадлежности.

4. Не продезинфицированы предметы контактировавшие с кровью

Не грубые ошибки:

1. Время ожидания агглютинации менее 5 мин.

2. Не внесен физраствор в случае наблюдаемой агглютинации.

3. Выполнение манипуляции «на весу».

Сдал – отсутствие грубых ошибок, наличие не более двух не грубых ошибок.

Не сдал – наличие грубых ошибок, наличие более двух не грубых ошибок.

При совершении грубой ошибки преподаватель может попросить повторить соответствующий этап манипуляции. Если ошибка повторяется – не сдал. Допускается не более одного повторения.

Сущность всех методов определения резус-фактора заключается в прохождении реакции склеивания (агглютинации) эритроцитов.

Метод конглютинации

Для проведения анализа конглютинативным методом используют сосуды Петри, пипетки одноразовые, физраствор, стандартные serum ко всем группам крови.

Проведение анализа заключается в следующих действиях лаборанта:

• Наносят на поверхность чашки Петри три ряда(серии) капель реагента, по две в каждом;
• В каждую серию добавляют каплю испытуемой крови и по капельке контрольных позитивных и контрольных негативных эритроцитов;
• Смешивают и выдерживают на водяной бане при 47°C десять минут;
• Определяют результат. Позитивным считают выпадение хлопьев, а негативным их отсутствие.

Метод цоликлонов

Фактор резус обнаруживают при помощи моноклональных антител. Это иммуноглобулины в крови, которые продуцируются клетками, произошедшими от одной предшественницы, то есть моноклоном. Реагенты, выделенные из таких клеток, получили название цоликлоны.

Ампулы с цоликлонами

Определение резус-фактора крови цоликлонами проводят в натуральной крови. Используют метод прямого скучивания на планшете. В лунку пластины вносят одну крупную каплю цоликлона, рядом помещают каплю крови небольшого размера. Кровь смешивают с реагентом при покачивании планшета. Первые признаки склеивания эритроцитов появляются, спустя 15 секунд, но результат определяют через три минуты.

ПОДРОБНОСТИ:   Перенесенный инфаркт миокарда

Ускоренный метод

Используют универсальную serum антирезус. Определение резус фактора крови методика ускоренная включает:

• Внесение в пробирку капли крови и двух капель препарата «антирезус»;
• Перемешивают содержимое пробирки поворачиванием без встряхивания. Содержимое равномерно распространяется по стенке пробирки;
• Добавление в пробирку физраствора в количестве около 3 мл и перемешивание содержимого при неоднократном переворачивании посуды;
• Наблюдение хлопьеобразования. Там, где они формируются, кровь Rh .
• Этот метод быстрый, но не точный. Псевдопозитивная реакция с Rh- эритроцитами проявляется в случае нахождения на поверхности эритроцитов антигенов в крови, отношения к Rh не имеющих. Параллельно проводят ещё один тест с контрольной эссенцией усилителя. Если и в этом случае образуются хлопья, результат признают недостоверным и тестирование крови повторяют с новым реагентом.

Желатиновый метод

Широко используют желатиновый ускоренный метод определения Rh. Он состоит в добавке к крови одной капли 10 % эссенции желатина, десятиминутной выдержки пробирок в термостате при 37, с последующим добавлением подогретого изотонического р-ра NaCl. Желатин препятствует образованию неспецифической агглютинации.

На основании этого открытия у людей выделено 4 основных вида группы крови:

• 1-я, не содержащая агглютиногенов, но содержащая оба агглютинина а и b, это — самая распространенная группа крови, которой обладают 45% населения планеты;
• 2-я, содержащая агглютиноген А и агглютинин b, определяется у 35% людей;
• 3-я, в которой есть агглютиноген В и агглютинин а, ее имеют 13% людей;
• 4-я, содержащая оба агглютиногена А и В, и не содержащая агглютининов, такая группа крови самая редкая, она определяется лишь у 7% населения.

Номер группы крови	Формула
I.	0(I)
II.	A(II)
III.	В(III)
IV.	АВ(IY)

Групповая принадлежность крови передается по наследству. Может ли поменяться группа крови — на этот вопрос ответ однозначен: не может. Хотя истории медицины известен единственный случай, связанный с генными мутациями. Ген, определяющий группу крови, находится в 9-й паре хромосомного набора человека.

Несмотря на открытие Ландштейнером групп крови, все же продолжали иметь место трансфузионные реакции во время переливания.

Ученый продолжал свои исследования, и совместно со своими коллегами Винером и Левайном ему удалось обнаружить еще один специфический белок-антиген эритроцитов — резус-фактор.

Вначале он был выявлен у человекообразной обезьяны макаки-резус, откуда и получил свое название.

Особенность резус-антигена состоит в том, что при попадании в кровь людей, его не имеющих, он способствует выработке антирезус-антител. При повторном контакте с резус-фактором эти антитела дают тяжелую гемолитическую реакцию, которая называется резус-конфликтом.

Группа крови и резус-фактор подлежат обязательному определению в следующих случаях:

• для проведения переливания крови;
• для пересадки костного мозга;
• перед любой операцией;
• при беременности;
• при заболеваниях крови;
• у новорожденных при гемолитической желтухе (резус-несовместимости с матерью).

Однако в идеале сведения о групповой и резус-принадлежности должны быть у каждого человека — как у взрослого, так и у ребенка. Никогда нельзя исключить случаи тяжелой травмы или острого заболевания, когда может срочно понадобиться кровь.

Определение группы крови проводится специально полученными моноклональными антителами по системе АВ0, то есть агглютининами сыворотки, которые дают склеивание эритроцитов при контакте с одноименными агглютиногенами.

Алгоритм определения группы крови следующий:

1. Подготавливают цоликлоны (моноклональные антитела) анти-А — ампулы розового цвета, и анти-В — ампулы синего цвета. Подготавливают 2 чистых пипетки, стеклянные палочки для смешивания и предметные стекла, одноразовый шприц на 5 мл для взятия крови, пробирку.
2. Выполняют забор крови из вены.
3. На предметное стекло или специальный маркированный планшет наносят по большой капле цоликлонов (0,1 мл), к ним подмешивают отдельными стеклянными палочками маленькие капли исследуемой крови (0,01 мл).
4. Наблюдают за результатом 3-5 минут. Капля с примешанной кровью может быть гомогенной — реакция минус (-), или выпадают хлопья — реакция плюс или агглютинация ( ). Оценка результатов обязательно проводится врачом. Варианты исследования определения группы крови представлены в таблице:

Реакция с цоликлоном анти-А	Реакция с цоликлоном анти-В	Групповая принадлежность крови
–	–	0(I)
–	А(II)
–	В(III)
АВ(IY)

Это лишь предварительное исследование. Далее пробирка с кровью направляется в лабораторию для исследования по специальной технологии, в сопровождении специального заполненного бланка с результатами, фамилией и подписью врача.

Определение резус-фактора выполняется аналогично определению группы крови, то есть с помощью моноклонального антитела сыворотки к резус-антигену. На специальную чистую белую керамическую поверхность наносят большую каплю реагента (цоликлона) и малую каплю только что взятой крови, в таких же пропорциях (10:1). Кровь осторожно смешивают стеклянной палочкой с реагентом.

Определение резус фактора цоликлонами занимает меньше времени, потому что реакция наступает уже через 10-15 секунд. Однако необходимо выдержать максимальный срок — 3 минуты. Так же, как и в случае определения группы крови, пробирку с кровью направляют в лабораторию.

В медицинской практике сегодня широко применяют удобный и быстрый экспресс-метод определения групповой принадлежности и резус-фактора с помощью сухих цоликлонов, которые разводятся стерильной водой для инъекций непосредственно перед исследованием. Метод называется «Эритротест-группокарт», он очень удобен как в условиях клиник, так и в экстремальных, и в полевых условиях.

Определение резус-принадлежности крови

Определение резус-принадлежности крови С ПОМОЩЬЮ СТАНДАРТНЫХ СЫВОРОТОКОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ ЦОЛИКЛОНОВ

Определение резус-принадлежности крови С ПОМОЩЬЮ СТАНДАРТНЫХ СЫВОРОТОК

Понятие резус-фактор — слишком общее (и устаревшее). Система резус антигенов многообразна. Современные методы исследования позволяют делать тесты индивидуально по резусу D, С, с, Е, е. Кроме этого, необходимо выявлять случаи со слабым D-антигеном или вариабильным D-антигеном. Вся эта информация тоже крайне важна при подборе донора в случае необходимости.

Ход работы. Определение резус-принадлежности крови проводится с помощью стандартной универсальной сыворотки «антирезус» для всех групп крови. В пробирку вводят одну каплю (0,05 мл) исследуемой  крови   или  эритроцитов   и  добавляют   1—2  капли  стандартного универсального реагента «антирезус» той же группы крови.

Перешивают    содержимое    путем    встряхивания    пробирки и помещают ее на водяную баню на 5 минут при температуре 370С, так как иммунная реакция с антигеном требует оптимальной температуры.   Как правило, агглютинация наступает в течение 3-5 мин.

  По истечении этого времени  для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2—3 мл изотонического раствора хлорида натрия и перемешивают  (но взбалтывая!), 2—3 раза переворачивая пробирку. 

В некоторых случаях не представляется возможным определение резус-принадлежности реципиента, тогда пользуются индивидуальной пробой на резус-совместимость крови донора и реципиента.

На чашку Петри наносят 2 капли сыворотки крови больного и маленькую каплю переливаемой крови, их смешивают и ставят на водяную баню (42-45 °С) на 10 мин. Если наступила агглютинация, то кровь донора несовместима с кровью реципиента и ее переливать нельзя.

Трактовка результатов. Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом. При положительном резуль­тате агглютинация выражается в появлении хлопьев из склеенных эритроцитов на фоне просветленной жидкости.

При отрицательном результате жидкость в пробирке остается равномерно окрашенной, без признаков агглю­тинации эритроцитов. Результат учитывают как истинный после проверки контрольных, образцов, т. е.

при поло­жительном результате со стандартными резус-отрицательными эритроцитами, одногруппными с исследуемой кровью. 

 ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ ЦОЛИКЛОНОВ

 Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей  – носителей анти-D и анти-С гибридом. Цоликлоны Анти-D, Анти-С, Анти-с предназначены для определения резус принадлежности крови.

Ход определения. На планшет индивидуальными пипетками наносятся цоликлоны Анти-D, Анти-С, Анти-с по одной большой капле (0,1мл). Рядом с каплями антител наносится по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 мл). Кровь смешивается с реагентом.

Наблюдается ход реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение  трех минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек.

, но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности резус-антигена. При использовании цоликлонов термостатировать не требуется, 

Интерпретация результатов. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов.

Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья.

При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Наличие агглютинации с Анти-D, Анти-С или Анти-с цоликлонами свидетельствует о том, что кровь резус-положительная, а отсутствие агглютинации – что кровь резус-отрицательная.

Вас могут заинтересовать другие наши публикации:

Как вирус Зика влияет на мозг нерожденных детей?Почему родителям стоит чаще целоваться при детях?Почему одиночество повышает риск инсульта и инфаркта?Раскрыт секрет быстрого старенияДочери матерей с лишним весом, чаще страдают ожирениемВождение автомобиля приводит к ожирению

29

29
Методы определения групп крови и
резус-фактора. Профилактика возможных
ошибок

Определение
групп крови с помощью стандартных
сывороток. В
лунки планшета для определения групп
крови последовательно наносят пипетками
по одной крупной капле стандартной
сыворотки групп 0(1), А(П), В(Ш) двух различных
серий каждой группы.

Затем наносят в
каждую лупку по капле исследуемой крови,
в 5 — 10 раз меньшую сыворотки. Сухими
стеклянными палочками или путем
покачивания планшета смешивают
стандартные сыворотки и исследуемую
кровь. Через 5 минут оценивают результат
(табл. 2).

Таблица 2

Определение
групп крови с помощью стандартных
сывороток

Группа исследуемой крови	Стандартные сыворотки
0(I)	А(II)	В (III)
0(I)	—	—	—
А(II)	+	—	+
В(III)	+	+	—
AB(IV)	+	+	+

Определение
групп крови по стандартным эритроцитам.
В
лунки планшета наносят большие капли
плазмы исследуемой крови.

Рядом с каждой
каплей плазмы последовательно наносят
по небольшой капле стандартных эритроцитов
групп 0(1), А(II), В(III).
Капли перемешивают покачиванием
планшета.

Через 5 минут к каждой капле
смеси добавляют по 1 капле физиологического
раствора и учитывают результат.

Таблица
3

Определение
групп крови с помощью стандартных
эритроцитов

Группа исследуемой крови	Стандартные эритроциты
0(I)	А(II)	В (III)
0(I)	—	+	+
А(II)	—	—	+
В(III)	—	+	—
AB(IV)	—	—	—

Определение
резус-фактора. На
дно сухой пробирки наносят 1
большую каплю универсального реагента
анти-резус, затем добавляют
такую же каплю исследуемой крови.

После
встряхивания пробирки
производят перемешивание сыворотки
анти-резус и крови в течение
5 минут по стенкам пробирки, после чего
добавляют 5 — 7 мл физиологического
раствора.

Наличие агглютинации
свидетельствует о
присутствии резус-фактора.

Определение
групп крови с помощью цоликлонов.
Цоликлоны
анти-А,
анти-В и анти-АВ предназначены для
определения групп крови
человека системы АВО в прямых реакциях
гемагглютинации и применяются
взамен или параллельно с поликлональными
иммунными сыворотками.

Моноклональные
анти-А и анти-В антитела продуцируются
двумя
мышиными гибридомами и принадлежат к
иммуноглобулинам класса
М. Цоликлоны изготовляются из асцитной
жидкости мышей-носителей
анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон анти-АВ
представляет
собой смесь моноклональных анти-А и
анти-В антител.

Цоликлоны
выпускаются в жидкой форме во флаконах
объемом 5
— 10 мл. Цоликлон анти-А — желтого цвета,
анти-В — синего, анти-АВ
— бесцветный. В качестве консерванта
применяется азид натрия.

Техника
определения групп крови. Определение
производится в нативной
крови, взятой в консервант; в крови,
взятой без консерванта, в
том числе из пальца. Используется метод
прямой гемагглютинации на пластине или
планшете, определение производится в
помещении с хорошим
освещением при температуре 15 — 25 X.

1. Наносят на пластину или планшет индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.

2. Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 — 0,03 мл).

3. Смешивают кровь с реагентом, покачивая планшет.

4. Наблюдают за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3 — 5 секунд, но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

5. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агтлютинаты видны в виде мелких красных агретатов, быстро смешивающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

6. Интерпретация результатов реакции агглютинации с цоликлонами представлена в табл. 4.

Таблица 4

Определение
групп крови с помощью цоликлонов

Группа исследуемой крови	Стандартные эритроциты
Анти-А	Анти-В	Анти-АВ
0(I)	_	_	—
А(II)	+	—	+
В(III)	—	+	+
АВ(IV)	+	+	+

Примечание:
знаком
(+) обозначено наличие агглютинации,
знаком (-) — се
отсутствие

При
положительном результате реакции
агглютинации со всеми гремя цоликлонами
необходимо исключить спонтанную
неспецифическую аглютинацию исследуемых
эритроцитов. Для этого смешивают на
плоскости 1 каплю исследуемых эритроцитов
с каплей физиологического раствора.
Кровь можно отнести к группе AB(IV)
только при отсутствии агглютинации
эритроцитов в физиологическом растворе.

Определение
резус-фактора с помощью цоликлона. В
лупку планшета наносят 1 большую каплю
цоликлона анти-Д-суперт
рядом наносят 1 маленькую каплю исследуемой
крови.

Покачивая
планшет, смешивают кровь с цоликлоном.
За ходом реакции наблюдают в течение 3
минут. Наличие агглютинации свидетельствует
о присутствии резус-фактора.